Βιολογικός απομονωτής Trometamol βάσεων 77-86-1 Tris

Τρις βάση 77-86-1 Βιολογικός αποθηκητής Τρομεταμόλη

Χρησιμοποιήσεις του Tris Buffer στην ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών και το Western Blotting

Τα Tris buffers είναι αναπόσπαστο μέρος της ηλεκτροφορέσης πρωτεϊνών και του western blotting.Όλα τα κοινά μπουφέρα είναι διαθέσιμα με προμιξασία., ή, αν προτιμάτε να φτιάξετε το δικό σας Tris buffer, μπορείτε να ξεκινήσετε με καθαρισμένη σκόνη Tris, γλυκίνη, και άλλα αντιδραστήρια buffer μοριακής βιολογίας.

Τα περισσότερα σκεύη SDS χρησιμοποιούν ένα διακοπτό σύστημα Tris buffer.8Σε αυτό το pH, τα ιονισμένα ιόντα χλωριούχου μεταναστεύουν γρήγορα, αυξάνοντας το pH πίσω τους και δημιουργώντας μια κλίση τάσης με μια ζώνη χαμηλής αγωγιμότητας.η οποία προκαλεί την ιονισμό της γλυκίνης (από το τρέχον απόθεμα) και τη μετανάστευσή της πίσω από το μέτωπο χλωριούχουΤα περισσότερα πεπτίδια στο δείγμα, τα οποία έχουν αρνητικό φορτίο λόγω της δεσμευμένης SDS, μεταναστεύουν μεταξύ του χλωριούχου και της γλυκίνης, σχηματίζοντας μια στενή ζώνη και ως εκ τούτου γίνονται "συσταθέντα".

Μόλις η στοίβα φτάσει στο ζελέ που διαλύεται, το οποίο βρίσκεται σε υψηλότερο pH (συνήθως pH 8,7 ̇ 8,8), η αυξημένη ιονισμός της γλυκίνης την κάνει να επιταχύνει και να ξεπεράσει τα πεπτίδια.το μικρότερο μέγεθος πόρων του διαλύτη γέλης αρχίζει να έχει επίδραση σίτισης, με αποτέλεσμα τον διαχωρισμό των πεπτιδίων ανά μέγεθος.

Τα περισσότερα δυτικά πρωτόκολλα blotting χρησιμοποιούν ένα Tris buffer χαμηλής ιονικής αντοχής για τη μεταφορά πρωτεϊνών.

Χρήση Tris Buffer στην ηλεκτροφόρηση αγαρόζης πυρηνικού οξέος

Τα δύο κύρια buffers είναι το TBE (Tris borate/EDTA) και το TAE (Tris acetate/EDTA).Αν και υπάρχουν ορισμένες διαφορές στην ανάλυση των διαφόρων μορφών DNA και την κινητικότητά τους κατά την ηλεκτροφόρησηΤα ιόντα βοραίου στο TBE αναστέλλουν πολλά ένζυμα, έτσι χωρίς να εκτελέσει κάποιο είδος καθαρισμού DNA μετά την ηλεκτροφορέση,Ορισμένες ενζύμιες χειραγωγίες μπορεί να μην λειτουργήσουνΩς εκ τούτου, το TAE buffer είναι ευνοημένο για καθημερινή χρήση στα περισσότερα εργαστήρια DNA.

Φτιάχνοντας ένα Tris Buffer

Το Tris buffer είναι μια καλή επιλογή για τα περισσότερα βιολογικά συστήματα, επειδή έχει pKa περίπου 8,1 σε 25 °C, καθιστώντας το αποτελεσματικό buffer στην περιοχή του pH 7−9.Αυτή η περιοχή pH είναι κατάλληλη για τις περισσότερες βιολογικές διεργασίεςΗ σκόνη Tris είναι επίσης λιγότερο δαπανηρή και πιο ανθεκτική από πιο εξειδικευμένους αποσβεστήρες όπως το HEPES.

Υπάρχουν δύο τρόποι για να γίνει ένα διάλυμα Tris buffer.και στη συνέχεια προστίθενται αλικουότα ενός διαλύματος (συνήθως Tris HCl) στο άλλο (συνήθως Tris base) διαλύμα, ενώ παρακολουθείται το pH έως ότου ληφθεί το σωστό pHΣτην πράξη, αυτό γίνεται πολύ σπάνια.

Η συνήθης μέθοδος παρασκευής των περισσότερων από τους συνήθως χρησιμοποιούμενους Tris buffers είναι να ξεκινάμε μόνο με βάση Tris.και στη συνέχεια το απόθεμα ασφαλείας γίνεται μέχρι το επιθυμητό όγκοΥποθέτοντας ότι δεν υπάρχει υπέρβαση κατά τη διάρκεια της ρύθμισης του pH, η μέθοδος αυτή δεν αλλάζει την ιονική αντοχή.ή χρησιμοποιώντας Tris HCl και προσαρμόζοντας το pH με NaOHΑνάλογα με την προβλεπόμενη χρήση του Tris buffer, μια τέτοια αλλαγή μπορεί να είναι σημαντική ή όχι.

Κατά την κατασκευή ενός Tris buffer, είναι σημαντικό να χρησιμοποιείται ένα ηλεκτρόδιο συμβατό με το Tris κατά τη ρύθμιση του pH.Τα ηλεκτρόδια Ag/AgCl μονοσύνδεσης μπορούν να παρουσιάσουν αστάθεια όταν χρησιμοποιούνται με τα buffers Tris επειδή το ασήμι σταδιακά καταρρέει και φράζει το ηλεκτρόδιοΗ χρήση ηλεκτροδίων αναφοράς διπλής σύνδεσης ή καλομελίας εξασφαλίζει ακριβείς μετρήσεις pH στο απόθεμα ασφαλείας Tris.