εταιρικά νέα για Μην αγοράζετε το λάθος, τα PIPES και τα HEPES είναι πολύ διαφορετικά.

Σε βιοχημικά πειράματα και κυτταρικές καλλιέργειες, η επιλογή του κατάλληλου αποθέτησης είναι ένα από τα βασικά βήματα για να εξασφαλιστεί η ακρίβεια και η σταθερότητα του πειράματος.Το N'-bis (((2-αιθανοσουλφονικό οξύ)) και το HEPES (4-(2-υδροξυαιθυλο)-1-πιπαραζινιτενανοσουλφονικό οξύ) είναι δύο συνηθισμένα χρησιμοποιούμενα αποσβεστήριαΑν και όλα αυτά διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση του pH των διαλύσεων, οι ιδιότητές τους, τα σενάρια εφαρμογής και οι προφυλάξεις είναι αρκετά διαφορετικές.Παρακάτω παρουσιάζεται μια λεπτομερή ανάλυση των σημαντικών διαφορών μεταξύ των PIPES και των HEPES για να βοηθηθούν οι επιστήμονες ερευνητές και οι τεχνικοί εργαστηρίου να επιλέξουν και να χρησιμοποιήσουν σωστά αυτούς τους δύο θωρακιστές..

一Χημικές ιδιότητες και διαλυτότητα των ΠΙΡΕΣ και των ΕΡΕΣ
 

1. HEPES
 

(1) Χημικές ιδιότητες: Το HEPES είναι ένα ζβιτεριονικό απόθεμα ασφαλείας που περιέχει αμινοξέα και σουλφονικά οξέα στη μοριακή του δομή,Η ατμόσφαιρα του υδρογόνου μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αποθήκευση των μεταβολών της συγκέντρωσης ιόντων υδρογόνου σε ένα ευρύ φάσμα pH (6.8-8.2) και διατηρούν τη σταθερότητα του pH του διαλύματος.
 

(2) Λύσιμη: Το HEPES είναι εξαιρετικά διαλυτό στο νερό, γεγονός που του επιτρέπει να χρησιμοποιείται εύκολα σε διάφορα βιοχημικά πειραματικά συστήματα χωρίς να απαιτούνται πρόσθετα βήματα διάλυσης.

2. ΠΙΠΕΣ
 

(1) Χημικές ιδιότητες: Το PIPES είναι επίσης ένα ιδανικό απο tampon με ελαφρώς στενότερο εύρος pH από το HEPES, στα 6,1-7.5Ο δακτύλιος πιπεραζίνης και οι ομάδες σουλφονικού οξέος στη μοριακή δομή του του δίνουν την ικανότητα να μαστώνει το pH υπό συγκεκριμένες συνθήκες.
 

(2) Λύσιμη: Σε αντίθεση με το HEPES, το PIPES είναι αδιάλυτο σε νερό, αλλά διαλυτό σε υδατικό διάλυμα NaOH.και οι ιδιότητες διαλυτότητας πρέπει να λαμβάνονται υπόψη σε πραγματικά πειράματα..

2Σενάρια εφαρμογής και λειτουργικές διαφορές μεταξύ των PIPES και των HEPES
 

1Εφαρμογή του HEPES
 

(1) Κυτταρική καλλιέργεια: Το HEPES χρησιμοποιείται ευρέως σε κυτταρικά καλλιεργητικά μέσα διαφόρων τύπων οργανισμών, επειδή δεν είναι τοξικό για τα κύτταρα και δεν παρεμβαίνει στις φυσιολογικές βιοχημικές αντιδράσεις.ειδικά σε πειραματικά συστήματα που απαιτούν μεγάλο χρονικό διάστημα για τη διατήρηση σταθερής τιμής pH.
 

(2) Έρευνα πρωτεϊνών και ενζύμων: Στην έρευνα σταθερότητας των πρωτεϊνών, το HEPES χρησιμοποιείται συχνά ως απόσβεση, επειδή μπορεί να διατηρήσει σταθερό το pH του διαλύματος για μεγάλο χρονικό διάστημα.που είναι ευεργετικό στη διατήρηση της δομής και της λειτουργίας των πρωτεϊνώνΤαυτόχρονα, χρησιμοποιείται επίσης στην έρευνα πολύ πτητικών και ευαίσθητων στο pH πρωτεϊνών και ενζύμων.
 

(3) Μοριακή βιολογία: Στην εξαγωγή DNA/RNA, στα εργαλεία διάγνωσης PCR και στα βιοχημικά εργαλεία διάγνωσης, το HEPES είναι ένα σημαντικό συστατικό απόσβεσης για τη διασφάλιση της σταθερότητας του pH κατά τη διάρκεια του πειράματος.
 

2Εφαρμογή των ΠΙΠΕΣ
 

(1) Καθαρισμός πρωτεϊνών: Το PIPES έχει ειδικές εφαρμογές στον τομέα της καθαρισμού πρωτεϊνών,όπως ο καθαρισμός της φυσαλίδας χρησιμοποιώντας χρωματογραφία φωσφοκυτταρίνης και ο καθαρισμός των ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών ARF1 και ARF2 που δεσμεύουν το GTP με φίλτρο με τζελΤο χαρακτηριστικό του να μην σχηματίζει σταθερά συμπλέγματα με τα περισσότερα ιόντα μετάλλων το καθιστά να λειτουργεί καλά σε συστήματα διαλύματος που περιέχουν ιόντα μετάλλων.
 

(2) Χρωματογραφική ανάλυση: Στην χρωματογραφία ανταλλαγής κατιόντων, το PIPES χρησιμοποιείται συχνά ως συστατικό του δεσμευτικού αποθέματος ή του εξωτικού,αλλά η συγκέντρωσή του πρέπει να ελέγχεται αυστηρά για να αποφεύγονται τα πειραματικά λάθη που προκαλούνται από υπερβολική ιονική αντοχή ή αλλαγές στην τιμή pKa.
 

(3) Ειδικά βιοχημικά πειράματα: Παρόλο που το πεδίο εφαρμογής του PIPES είναι σχετικά στενό, παίζει αναντικατάστατο ρόλο ως απόσβεση σε ορισμένα ειδικά πειράματα,όπως το φωσφορικό ασβέστιο και το σύστημα κατακλυσμού DNA, AFM και πειράματα ηλεκτροποράσεως.

ΙΙΙ. Προφυλάξεις για τη χρήση των αποθηκών PIPES και HEPES
 

1Προφυλάξεις για το HEPES
 

(1) Διαταραχή: Αν και το HEPES δεν παρεμβαίνει στις βιοχημικές διεργασίες στις περισσότερες περιπτώσεις, παρεμβαίνει στην αντίδραση μεταξύ του DNA και των ενζύμων περιορισμού,Έτσι δεν είναι κατάλληλο για πειράματα που απαιτούν ακριβή έλεγχο της κοπής των ενζύμων DNA.Ταυτόχρονα, η μέθοδος του Lowry δεν είναι κατάλληλη για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες, γεγονός που μπορεί να επηρεάσει την ακρίβεια των αποτελεσμάτων προσδιορισμού.
 

(2) Επιλογή συγκέντρωσης: Όταν χρησιμοποιείται το HEPES, η κατάλληλη συγκέντρωση πρέπει να επιλέγεται σύμφωνα με τις πειραματικές απαιτήσεις.το μέσο καλλιέργειας περιέχει συχνά 20 mmol/L HEPES για να επιτευχθεί επαρκής ικανότητα αποθήκευσης.
 

2Προφυλάξεις για τις ΠΙΠΕΣ
 

(1) Διαλυτότητα: Πριν χρησιμοποιήσετε το PIPES, βεβαιωθείτε ότι έχει διαλυθεί πλήρως στο υδατικό διάλυμα NaOH για να αποφευχθεί η παρέμβαση αδιάλυτων σωματιδίων στο πείραμα.
 

(2) Σχηματισμός ελεύθερων ριζών: Το PIPES μπορεί να σχηματίσει ελεύθερες ριζές, επομένως δεν είναι κατάλληλο για χρήση σε πειράματα τα οποία πρέπει να αποφεύγουν τις αναζωογονητικές αντιδράσεις.
 

(3) Εξαρτησία από τη συγκέντρωση: Η τιμή pKa του PIPES εξαρτάται από τη συγκέντρωση και η ιονική του δύναμη είναι σχετικά μεγάλη.Πρέπει να δοθεί ιδιαίτερη προσοχή στην επιλογή και τον έλεγχο της συγκέντρωσης.